一种稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，包括以下步骤：对镉污染稻米进行脱脂处理，得到脱脂稻米粉；使用去离子水对脱脂稻米粉进行搅拌提取，获得清蛋白提取物和第一沉淀物；使用NaCl溶液对第一沉淀物进行搅拌提取，获得球蛋白提取物和第二沉淀物；使用NaOH溶液对第二沉淀物进行搅拌提取，获得谷蛋白提取物和第三沉淀物；使用乙醇溶液对第三沉淀物进行搅拌提取，获得醇溶蛋白提取物。本发明提供的技术方案中，采用Osborne分级提取与等电点沉淀相结合的方法提取镉污染稻米中的镉结合蛋白，具有提取的蛋白种类更全面、蛋白纯度更高的优点，且提取效率高、操作简单。